Efeito terapêutico do extrato de Baccharis anomala em células estreladas hepáticas ativadas

Abstract

O gênero Baccharis pertence à família Asteraceae e tem várias espécies amplamente utilizadas na medicina popular, possuindo muitos compostos de interesse farmacêutico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citotóxico, antiproliferativo e a reversão fenotípica do extrato de Baccharis anomala em células estreladas hepáticas ativadas (HSCs) e identificar os compostos presentes no extrato. Para avaliar o efeito citotóxico e antiproliferativo do extrato fracionado, foram utilizadas a liberação de lactato desidrogenase (LDH) e o método de exclusão de azul de Tripan. A reversão do fenótipo foi avaliada por coloração com Oil Red e pela expressão de PPAR-γ por RT-PCR. As frações obtidas a partir do extrato metanólico foram caracterizadas pela sua composição fenólica por HPLC. Os resultados mostraram que duas frações do extrato metanólico diminuíram a proliferação celular sem aumentar os níveis de liberação de LDH. A parada do ciclo celular foi avaliada usando 7-AAD e coloração por DAPI foi utilizada para avaliar a apoptose celular. As frações de B.anomala induziram a parada do ciclo celular em fase G1, a coloração por DAPI não revelou morte celular por apoptose. Coloração por Oil-RedO (ORO) mostrou a capacidade de indução da reversão fenotípica, a avaliação da expressão mRNA de PPAR-y por RT-PCR não foi alterada, sugerindo que exista uma via independente de PPAR-y envolvida. Os principais componentes identificados nas frações que apresentaram atividade biológica foram os ácidos hidroxibenzóico, clorogênico e cumárico. Nosso estudo foi capaz de mostrar o efeito antiproliferativo das frações de extrato metanólico de B.anomala, seu potencial para reverter o fenótipo ativado das células estreladas hepáticas e mostrou seu potencial para o tratamento da fibrose hepática.

The genus Baccharis belongs to the family Asteraceae and has several species widely used in folk medicine and own many compounds of pharmaceutical interest. The aim of this work was to evaluate the cytotoxic, antiproliferative effect and phenotypic reversion of Baccharis anomala extract on activated hepatic stellate cells (HSCs) and identify the compounds present in the extract. In order to evaluate the cytotoxic and antiproliferative effect of the fractionated extract, lactate dehydrogenase (LDH) release and the trypan blue exclusion method were used. The phenotype reversion was evaluated by staining with Oil Red and PPAR-γ expression by RT-PCR. The fractions obtained from the methanolic extract were characterized for their phenolic composition by HPLC. The results showed that two fractions of methanolic extract decreased cell proliferation without increasing LDH release levels. Cell cycle arrest was evaluated using 7-AAD and DAPI staining was used to evaluate indications of apoptosis. Fractions of B.anomala induced cell cycle arrest in G1 phase, while DAPI staining did not reveal cell death by apoptosis. Oil-Red (ORO) staining showed the ability of fractions to induce phenotypic reversion and the evaluation of PPAR-γ mRNA expression was not altered, suggesting that there is an independent PPAR-γ pathway involved. The main components identified in the fractions that presented biological activity were hydroxybenzoic, chlorogenic and coumaric acid. Our study was able to show the antiproliferative effect of methanolic extract fractions of B.anomala, its potential to reverse the activated phenotype of hepatic stellate cells and showed its potential for the treatment of liver fibrosis.