| Resumen: | A epilepsia é a condição neurológica grave de maior incidência no
mundo. É caracterizada por crises convulsivas recorrentes, provenientes de
descargas neuronais sincrônicas. Distúrbios na sinalização neuronal na fase
inicial do desenvolvimento podem acarretar em aumento na suscetibilidade a
crises convulsivas na fase adulta, assim como crises convulsivas na fase inicial
do desenvolvimento podem acarretar em alterações nos sistemas de
neurotransmissão. A sinalização adenosinérgica reconhecidamente é capaz
de agir como um anticonvulsivante endógeno, através de sua função
neuromoduladora. Perturbações na sinalização adenosinérgica em fases inicias
do desenvolvimento acarretam em alterações na suscetibilidade a crises
convulsivas de forma condicional ao estágio de desenvolvimento em que a
perturbação ocorre e tempo de exposição ao agente perturbador.
Nos quatro capítulos integrantes dessa tese foram abordados, sob
diferentes aspectos, fatores que influenciam a susceptibilidade a crise
convulsiva provocada pela exposição ao pentilenotetrazol (PTZ) utilizando
peixe-zebra. No primeiro capítulo, foi analisada a influência da temperatura na
sensibilidade do peixe-zebra ao PTZ, bem como a capacidade do antagonista
MK-801 de reverter os efeitos provocados pela hipertermia na suscetibilidade a
crises convulsivas induzidas por PTZ. Além de serem verificadas as possíveis
diferenças na suscetibilidade a crises convulsivas em função do gênero ou
peso.
No segundo capítulo, foi descrito o uso do bloqueio molecular transitório
através da técnica de morfolinos para bloquear a tradução dos transcritos
correspondentes aos receptores adenosinérgicos A1 e A2A no inicio da
embriogênese. Os animais que sofreram o bloqueio transitório foram avaliados
quanto a taxa de sobrevivência e morfologia até os 7 dias pós-fertilização (dpf)
e atividade locomotora e suscetibilidade a crises convulsivas provocadas por
PTZ aos 7 dpf e na fase adulta.
No terceiro capítulo, foi descrito o uso da técnica de morfolinos para
bloquear a tradução dos transcritos correspondentes a enzima ecto-5’-
nucleotidase (e5’nt) e transportadores concentrativos de nucleosídeo tipo 2
(CNT2) no inicio da embriogênese. Os animais que sofreram o bloqueio
transitório foram avaliados quanto a taxa de sobrevivência e morfologia aos 7
dpf e atividade locomotora e suscetibilidade a crises convulsivas provocadas
por PTZ aos 7dpf e na fase adulta.
No quarto capítulo, foi abordado o efeito da microinjeção de 8-
Ciclopentil-1,3-dipropilxantina (DPCPX), antagonista do receptor A1; ZM241385
antagonista do receptor A2A; cafeína, antagonista não-seletivo dos receptores
de adenosina; dipiridamol, bloqueador do transportador equilibrativo de
nucleosídeo (ENT) e Adenosina 5′-(α,β-metileno)difosfato (AMPCP), inibidor da
enzima ecto-5’-nucleotidase, nos ovos do peixe-zebra (1 hora pós-fertilização).
Os animais expostos a estes fármacos foram avaliados quanto a taxa de
sobrevivência, morfologia, atividade locomotora aos 7 dpf e suscetibilidade a
crises convulsivas provocadas por PTZ aos 7dpf e na fase adulta.
Nossos resultados apontam que a hipertermia aumenta a suscetibilidade
do peixe-zebra a crises convulsivas provocadas por PTZ e que esse efeito é
prevenido pela administração de MK-801. Além disso, não houve diferença na
suscetibilidade do PTZ dependente de gênero ou massa corporal.
Nossos resultados indicam que perturbações na sinalização
adenosinérgica através de bloqueio via morfolinos ou nas doses mais altas dos
fármacos acima citados, provocaram diminuição na taxa de sobrevivência e
altas taxas de alterações morfológicas. Nenhuma das abordagens provocou
alterações na atividade locomotora na fase inicial do desenvolvimento,
enquanto que na fase adulta foram verificadas alterações pontuais. Aos 7dpf
nenhum dos alvos bloqueados por morfolinos provocou alteração na
suscetibilidade a crises convulsivas provocadas por PTZ, enquanto que entre
os alvos bloqueados por fármacos houve alteração principalmente em animais
microinjetados com DPCPX, Cafeína e Dipiridamol. Já na fase adulta todos os
alvos bloqueados por morfolinos desencadearam em maior suscetibilidade a
crises convulsivas enquanto os bloqueados por fármacos exibiram alterações
em doses e estágio de convulsão específicos.
Esses resultados corroboram com uma série de estudos que reportam a
importância da sinalização adenosinérgica na fase inicial do desenvolvimento,
bem como os efeitos deletérios provenientes de perturbações tanto exógenas
quanto endógenas nessa via de sinalização.
Epilepsy is the most serious neurological condition in the world. It is
characterized by recurrent seizures from synchronous neuronal discharges.
Disturbances in neuronal signaling in the early stages of development may lead
to increased susceptibility to seizures in adulthood, as well as seizures in the
early stages of development may lead to alterations in neurotransmission
systems.
Adenosinergic signaling is known to act as an endogenous
anticonvulsant through its neuromodulatory function. Disturbances in
adenosinergic signaling in early stages of development lead to changes in the
susceptibility to seizures conditionally at the stage of development in which the
disturbance occurs, and time of exposure to the disturbing agent.
In the four chapters of this thesis, it was discussed about factors that
influence the susceptibility to pentylenetetrazole (PTZ)-induced seizure under
different aspects using zebrafish. In the first chapter, it was analyzed the
influence of temperature on zebrafish sensitivity to PTZ as well as the ability of
the MK-801 antagonist to reverse the effects of hyperthermia on susceptibility to
PTZ-induced seizures. In addition, it was verifyed possible differences in the
susceptibility to seizures according to gender or weight.
In the second chapter, it was used transient molecular blockade through
the morpholine technique to block the translation of the transcripts
corresponding to the adenosinergic A1 and A2A receptors at the beginning of
embryogenesis. The animals that underwent transient blockade were evaluated
for survival rate and morphology, at 7 days post-fertilization (dpf) and locomotor
activity and susceptibility to seizures caused by PTZ at 7 dpf and in adulthood.
In the third chapter, it was used the morpholine technique to block the
translation of the transcripts corresponding to the enzyme ecto-5'-nucleotidase
and concentrative nucleoside transporters type 2 (CNT2) at the beginning of
embryogenesis. The animals that underwent transient blockade were evaluated
for survival rate and morphology at 7 days post-fertilization (dpf) and locomotor
activity and susceptibility to seizures caused by PTZ at 7 dpf and in adulthood.
In the fourth chapter, it was performed microinjection of the 8-
Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine (DPCPX), antagonist of A1 receptor;
ZM241385, A2A antagonist; caffeine, non-selective adenosine receptor
antagonist; dipyridamole, equilibrative nucleoside transporter blocker (ENT) and
Adenosine 5 '- (α, β-methylene) diphosphate (AMPCP), ecto-5'-nucleotidase
enzyme inhibitor, in zebrafish eggs (1 hour post -fertilization). The animals
exposed to these drugs were evaluated for survival rate, morphology and
locomotor activity at 7 dpf and susceptibility to seizures caused by PTZ at 7 dpf
and in adulthood.
These results indicated that hyperthermia increases the susceptibility of
zebrafish to PTZ-induced seizures and that this effect is prevented by the
administration of MK-801. In addition, there was no difference in susceptibility to
PTZ dependent on gender or body mass.
These results indicated that disturbances in adenosinergic signaling
through blockade via morpholine or in the higher doses of the drugs mentioned
above, caused a decrease in the survival rate and high rates of morphological
changes. None of the approaches caused alterations in the locomotor activity in
the initial phase of development, whereas in the adult phase, there were
occasional changes. At 7dpf, none of the targets blocked by morpholine caused
alterations in the susceptibility to seizures caused by PTZ, whereas among the
targets blocked by drugs there was alteration mainly in animals microinjected
with DPCPX, Caffeine and Dipyridamole. However, in the adult phase all the
targets blocked by morpholine triggered in greater susceptibility to seizures,
while those blocked by drugs showed changes in specific doses and seizure
stage.
These results corroborate a series of studies that report the importance
of adenosinergic signaling in the early stages of development as well as the
deleterious effects of both exogenous and endogenous perturbations in this
signaling pathway. |
