Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: http://hdl.handle.net/10923/7458
Tipo: masterThesis
Título: Comparação de diferentes metodologias para descelularização de veias humanas
Autor(es): Oliveira, Madaí Cruz Lopes de
Orientador: Silva, Jefferson Luis Braga da
Editor: Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul
Programa: Programa de Pós-Graduação em Medicina e Ciências da Saúde
Fecha de Publicación: 2015
Palabras clave: MEDICINA
BIOTECNOLOGIA
POLÍMEROS
MATERIAIS BIOCOMPATÍVEIS
Resumen: Introduction : Non-living tissues have shown to be an important source of biomaterials, with advantages such as hydrophilicity, low toxicicidade, low immunogenicity, in addition to good adherence and cell multiplication. However, for these biomaterials to be used, techniques of descellularization is being used to make it less antigenic and also to serve as scaffolds. Objectives : The present study aims to compare different agents of descellularization regarding the above mentioned parameters, using detergents known to be effective for these processes. Materials and Methods : The samples used in this study were obtained from saphenous veins of seven individuals donors, in treatment of myocardial revascularization surgery and provided by the team of cardiovascular surgery of Hospital São Lucas da PUCRS, after signing the informed consent form. These samples were tested simultaneously three different detergents, sodium dodecyl sulfate (SDS), TRITON-X and trypsin, in addition to a control group containing Phosphate-Buffered Saline (PBS). After the process of descellularization and prior to the determination of cellularity, the samples were fixed in buffered formalin 10% during 24 hours, included in paraffin, sectioned (5 μ) and stained with hematoxylin and eosin. The number of cores was quantified in a radius of 0. 025 mm (objective 40x), in duplicate, corresponding to eight fields, with the aid of the software Image Pró-Plus 4. 5. 1. Data were analyzed using a model of analysis of variance for repeated measures (randomized blocks) with adjustment for multiple comparisons procedure of Finner's procedure were used. Results : The results evaluated all treatments showed a decrease in the number of cells, and the SDS the agent with greater descellularization. The TRITON-X and the Trypsin obtained similar values and there was no difference between them, for this process. Conclusion : In this way, it could be demonstrated that all detergents used, and the methodology it self, acts as agentes of descellularization in human veins and proved to be a promising agents to remove cells.
Introdução : Tecidos não vivos tem se mostrado uma importante fonte de biomateriais, apresentando vantagens como hidrofilidade, baixa toxicicidade, baixa imunogenicidade, além de boa adesão e multiplicação celular. Contudo, para que esses biomateriais sejam utilizados, técnicas de descelularização vêm sendo utilizadas para que sejam menos antigênicos e também para que sirvam como scaffolds. Objetivos : O presente estudo tem o objetivo de comparar diferentes agentes de descelularização quanto aos parâmetros citados acima, utilizando detergentes reconhecidamente eficazes para esses processos. Materiais e Métodos : As amostras utilizadas neste estudo foram obtidas de veias safenas de sete indivíduos doadores, em tratamento de cirurgia de revascularização do miocárdio e fornecidas pela equipe de cirurgia cardiovascular do Hospital São Lucas da PUCRS, após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE). Nessas amostras foram testados simultaneamente três diferentes detergentes, sódio dodecil sulfato (SDS), TRITON-X e tripsina, além de um grupo controle, contendo Phosphate-Buffered Saline (PBS) e um controle “a fresco”. Após o processo de descelularização e previamente à determinação da celularidade, as amostras foram fixadas em formalina tamponada 10% durante 24horas, incluídas em parafinas, seccionadas (5μ) e coradas com hematoxilina e eosina. O número de núcleos presentes foi quantificado em um raio de 0,025 mm (objetiva 40x), em duplicata, correspondente a oito campos, com o auxílio do software Image Pró-Plus 4. 5. 1. Os dados foram analisados em modelo de análise de variância de medidas repetidas (blocos casualizados) com ajuste de comparações múltiplas pelo procedimento de Finner. Resultados : Dos resultados avaliados todos os tratamentos mostraram um decréscimo no número de células, sendo o SDS o agente com maior descelularização. O TRITON-X e a Tripsina obtiveram valores similares e não houve diferença entre eles, para esse processo. Conclusão : Dessa forma, demonstrou-se que todos os detergentes empregados agem como descelularizadores em veias humanas, e mostram-se como promissores agentes de remoção celular.
URI: http://hdl.handle.net/10923/7458
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