| Abstract: | As células-tronco provenientes da polpa de dentes adultos (DPSC) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os relatos histológicos temporais do seu destino ainda não foram demonstrados. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar o destino das DSPC-LacZ, bem como avaliar o efeito de algumas moléculas envolvidas na diferenciação endotelial destas células. Para isso, DPSC Lac-Z foram semeadas em scaffolds de fatias dentárias e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. 14 dias após a recuperação dos tecidos, observou-se células beta-galagtosidase positivas alinhadas ao longo das paredes internas das fatias de dente, sugerindo a diferenciação destas em células semelhantes á odontoblastos. Ainda neste período, células beta-galactosidase positivas foram localizadas próximas aos vasos sanguíneos do roedor, algumas formaram estruturas tubulares e continham elementos celulares dentro do seu lúmen. Aos 21 dias, um tecido muito semelhante a polpa dental foi encontrado dentro das fatias dentais, e no dia 28 o número de células betagalactosidade postivas era maior do que todos os periodos anteriores. Ainda, avaliou-se o papel da molécula VEGF e Ang-1 na diferenciação endotelial destas células bem como na fosforilação de algumas vias de sinalização. Para isso, um meio de cultura alpha- MEM suplementado com 50 ng/mL rhVEGF + 200 ng/mL rhAng-1, foi utlizado como estímulo para as DPSC se diferenciarem em células endoteliais. Durante um período de 28 dias as células expressaram marcadores endoteliais como VEGFR2, CD31, Ang-1 e Ang-2. Quando utilizamos células DPSC shRNA VEGFR-1 estimuladas pelas mesmas moléculas, a fosforilação de ERK e AKT foi aumentada, o que não ocorreu no grupo controle.
Teeth exhibit limited repair in response to damage, and studies have shown that dental pulp stem cells (DPSCs) probably provide a source of cells to replace those damaged and to facilitate repair. Additionally, in vivo transplantation into immunocompromised mice demonstrated the ability of DPSCs to generate functional dental tissue in the form of dentine/pulp-like complexes. Therefore, the purpose of this study was to characterize the endothelial fate of DPSCs in vivo and to start to understand the role of Tie2/Ang-1 signaling pathway on the regulation of the endothelial differentiation of DSPCs.! DPSCs stably transduced with LacZ were seeded into tooth slices and implanted into immunodeficient mice for 7, 14, 21 ad 28 days. A combination of in vitro and in vivo assays were performed to determine the role of Ang-1 in the vasculogenic fate of DPSCs. Histologic analysis and immunohistochemistry from the retrieved tooth slices were performed. Dental pulp stem cells seeded in tooth slice/scaffolds and transplanted into SCID mice showed a continuous crescent number of beta-galactosidase-positive odontoblastic and endothelial cells along the 7, 14, 21 and 28 days of the study. At 21 days beta-galactosidase-positive capillaries located close to murine blood vessels were detected, confirming our previous report (Cordeiro et al, 2008; Sakai et al, 2010). DPSCs exposed to Ang-1 differentiated into cells expressing VEFGR2, CD31 and Tie2. Exposure of VEGFR1-silenced DSPC to Ang-1 and VEGF induced the activation of STAT3, Erk and Akt, while VEGF alone inhibited the phosphorylation of STAT3. This is consistent with the role of Akt and STAT3 in the regulation of cell survival and cell-cell interation of DPSC through Tie2/Ang-1 signaling pathway. This study demonstrates that Angiopoietin-1 is involved in the vasculogenic differentiation of DSPCs. |
