| Resumen: | Liquid nitrogen cryotherapy has been used in several areas, including its use for therapeutic purposes. Concerning microbiology, there are a great number of researches focusing cold controlling effect on bacteria, mainly addressed to preventing their proliferation through freezing food. However, we have a limited knowledge of the intense and abrupt temperature drop effect, as that caused by liquid nitrogen spray, on microorganisms such as the Enterococcus faecalis bacteria. Thus, this work aims at analyzing, in vitro, the liquid nitrogen spray effect on bacteria cultivated in laboratories in liquid (BHI broth) and solid (agar-BHI) culture media. To that end, a suspension concentrated in 1,5 x 104 bacteria/ml was transferred to an sterilized glass phial and subjected to liquid nitrogen spray application. Spray was applied, according to different established protocols, through using an open cryogenic system (CRY-AC®) with an open extremity and a right angle adapter coupled together. After the freezing/defrosting cycle, a little amount (100 μL) of that suspension was transferred to test tubes filled with liquid medium and to Petri dishes containing solid medium, which were then incubated at a 36ºC temperature for 24h. The liquid medium spectrography results showed a discrete turbidity reduction with decrease in the bacterium population. Regarding the solid medium culture, results showed a decreased number of bacterium colonies in the experimental groups when compared to the negative-control groups, mainly in the tests with two application intervals. Analyzing the obtained results we can infer that liquid nitrogen spray cryotherapy interfered with the E. faecalis in vitro growth, but under this work test conditions such interference was not enough to eliminate the whole bacterium population and to assign a bactericide power to liquid nitrogen.
A crioterapia com nitrogênio líquido tem sido utilizada em diversas áreas, inclusive com finalidades terapêuticas. Na Microbiologia, é vasto o número de pesquisas que abordam o efeito controlador do frio em bactérias (criobiologia), principalmente com a intenção de evitar sua proliferação. No entanto, pouco se sabe a respeito do efeito da queda brusca e intensa da temperatura, como aquela provocada pelo nitrogênio líquido, na forma de spray, em microrganismos como as bactérias Enterococcus faecalis, freqüentemente encontradas em canais com polpas necrosadas, infecções pulpares e periapicais refratárias ao tratamento endodôntico. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi analisar, in vitro, o efeito do spray de nitrogênio líquido nessas bactérias cultivadas em laboratório, em meios de cultura líquido (caldo BHI) e sólido (ágar-BHI). Para isso, uma suspensão de soro fisiológico concentrada em 1,5 x 10⁴ bactérias/mL foi transferida para um frasco de vidro esterilizado e, em seguida, submetida à ação do spray de nitrogênio líquido. Através de diferentes protocolos estabelecidos, nos quais se variou o número de aplicações, com a presença ou não de um dispositivo que acelerava o descongelamento, o spray foi aplicado por meio de um sistema criogênico aberto (CRY-AC do Brasil – Osasco/SP), com uma ponta aberta acoplada num adaptador em ângulo reto. Após o ciclo de congelamento e descongelamento, um volume de 100 µL dessa suspensão foi inoculado em tubos com tampa rosqueável, contendo meio líquido e para placas contendo meio sólido, que foram então incubados por 24 h, a 36ºC. Para o meio líquido, os resultados obtidos na espectrofotometria mostraram discreta redução da turbidez, implicando numa redução da população bacteriana .Com relação ao cultivo em meio sólido, os resultados indicaram uma diminuição do número de colônias bacterianas dos grupos experimentais em relação ao grupo controle-positivo, principalmente nos ensaios com 2 intervalos de aplicação. Os resultados obtidos permitiram concluir que a aplicação do spray de nitrogênio líquido reduziu o crescimento in vitro, de Enterococcus faecalis. Entretanto, sob as condições testadas, não foi suficiente para eliminar toda a população bacteriana, a ponto de atribuir o poder bactericida ao nitrogênio líquido. |
