Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10923/1354
Type: masterThesis
Title: Efeito terapêutico da N-acetilcisteína e frutose-1,6- bisfosfato no tratamento da sepse experimental
Author(s): Mello, Ricardo Obalski de
Advisor: Oliveira, Jarbas Rodrigues de
Publisher: Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul
Graduate Program: Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
Issue Date: 2010
Keywords: BIOLOGIA CELULAR
BIOLOGIA MOLECULAR
ESTRESSE OXIDATIVO
DROGAS - PESQUISAS
SEPSE
Abstract: A sepse é uma síndrome complexa ocasionada pela resposta inflamatória sistêmica descontrolada do indivíduo, que representa um grave problema epidemiológico em todo mundo. Sendo que, as citocinas inflamatórias representam o papel central na patogênese do choque séptico. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito de duas drogas, N-acetilcisteína (NAC), um tiol-composto precursor da glutationa e a Frutose-1,6-bisfosfato (FBP), um metabólito glicolítico de alta energia, no tratamento da sepse experimental, através da avaliação do efeito imunomodulador (in vitro) e efeito terapêutico (in vivo), com o intuito de se obter drogas alternativas para o tratamento do choque séptico. O modelo experimental escolhido para o estudo in vitro, foi à cultura de células mononucleares do sangue periférico isoladas de humanos saudáveis através de gradiente de centrifugação, Os linfócitos T foram estimulados durante 96 h com fitohemaglutinina, sendo utilizadas concentrações isoladas de NAC nas concentrações de 1, 5, 10 e 15 mM e associadas à FBP na concentração de 1,25 mM. Os resultados sugerem que tanto a NAC como sua associação com a FBP inibem a proliferação celular, agindo como potentes agentes na imunomodulação, sugerindo o uso destas contra doenças inflamatórias. Para a experimentação in vivo, utilizaram-se ratos Wistar machos, divididos em cinco grupos experimentais: (i) controle normal (não induzidos); (ii) controle séptico (induzidos com uma cápsula com conteúdo fecal não estéril e E. coli (1,5 x 109 C. F. U. ); (iii) induzidos e tratados com FBP (500 mg/kg I. P. ); (iv) induzidos e tratados com NAC (150 mg/kg I. P. ); (v) induzidos e tratados com a associação da FBP (500 mg/kg I. P. ) com NAC (150 mg/kg I. P. ).Na tentativa de se explicar o mecanismo de ação, principalmente o resultados do grupo séptico e tratado com NAC, foram realizadas análises hematológicas, dosagens bioquímicas, além da verificação do estresse oxidativo tecidual. Também foram realizadas hemoculturas, a fim de se verificar se houve indução séptica. Nossos resultados sugerem que a NAC impediu a mortalidade dos animais após a indução séptica. Estes dados comprovam a validade do uso da NAC no tratamento da sepse, possivelmente pela sua propriedade de ser um precursor da glutationa, pela sua capacidade hepatoprotetora e possível proteção renal. Nossos dados também demonstram que a ação sinérgica com FBP não melhora o quadro, esta em parte explicada pelo aumento do TBARS renal e pela diminuição da glutationa hepática.
Sepsis is a syndrome caused by uncontrolled systemic inflammatory response of the individual, which represents a serious epidemiological problem worldwide. Since inflammatory cytokines represent a central part in the septic shock pathogenesis. The aim of this study was to investigate the effect of two drugs, Nacetylcysteine (NAC), a thiol-compound precursor of glutathione and fructose-1,6- bisphosphate (FBP), a high energy glycolytic metabolite, in the treatment of experimental sepsis. by evaluating the immunomodulatory effect (in vitro) and therapeutic (in vivo), in order to obtain alternative drugs for the treatment of septic shock. The experimental model chosen for the in vitro study was to culture of peripheral blood mononuclear cells were isolated from healthy humans through gradient centrifugation. T-Lymphocytes were stimulated for 96 h with phytohemagglutinin, being isoled from NAC used in concentrations of 1,5,10,15 mM or associated with 1. 25 mM FBP were tested. The results suggest that either NAC itself or association with FBP inhibits cellular proliferation, acting as potent immunomodulatory agents, suggesting their use in inflammatory diseases. For in vivo experiments, we used male Wistar rats that were divided into five experimental groups: (i) normal control (not induced), (ii) septic control (induced using a capsule with non sterile fecal content and E. coli (1,5 x 109 CFU), (iii) induced and treated with FBP (500 mg/kg IP), (iv) induced and treated with NAC (150 mg/kg IP), (v) induced and treated with the combination of FBP (500 mg/kg IP) with NAC (150 mg/kg IP).In attempting to explain the possible mechanism of action, mainly the results of the septic group and treated with NAC, complete blood analysis, biochemical measurements were performed, besides the verification of tissue oxidative stress. Were also performed blood cultures and in the different groups in order to check whether there was induction septic. Our results show that NAC prevented the mortality of animals after septic induction. These data confirm the validity of the use of NAC in the treatment of sepsis, possibly due to its property to be a precursor to glutathione, by their hepatoprotective ability and possible renal protection. Our data also show that the synergistic action with FBP does not improve the picture, and this can be partly explained by heightened activation of the immune (defense) or a decrease of hepatic glutathione.
URI: http://hdl.handle.net/10923/1354
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