Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10923/525
Type: doctoralThesis
Title: Efeito da terapia fotodinâmica (PDT) sobre culturas de Candida sp. e de células epiteliais: estudo in vitro
Author(s): Marinho, Sandra Aparecida
Advisor: Cherubini, Karen
Publisher: Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul
Graduate Program: Programa de Pós-Graduação em Odontologia
Issue Date: 2006
Keywords: ODONTOLOGIA
ESTOMATOLOGIA
TERAPIA FOTODINÂMICA
MUCOSA BUCAL
CANDIDÍASE
Abstract: The undiscriminated use of antifungal drugs has been associated to Candida sp. antifungal resistance, requiring new alternative methods for treatment of oral candidosis. The application of photodynamic therapy (PDT) have been investigated on inactivation of human-host pathogenic microorganisms. The present study was conducted to evaluate in vitro PDT action on Candida sp. and epithelial cells. Thirtyeight Candida sp. cultures obtained from patients' oral candidosis and HEp-2 cell cultures were submitted to PDT. Indium-gallium-aluminum-phosphide (InGaAIP) laser was applied in 100 J/cm2, 270 J/cm2 and 450 J/cm2 doses associated with 100 mg/mL of methylene blue photosensitiser. After PDT, the viability of CFUs (colony formation units) and epithelial cells were quantified. The three doses applied led to a significant inactivation of Candida sp. The 450 J/cm2 dose was the most efficacious, leading to 72.42% Candida sp. CFUs inactivation (P<0.05), followed by 270 J/cm2 and 100 J/cm2, for which inactivation rates were 45.87% and 22.83%, respectively. Candida albicans was significant more susceptible to treatment, showing 50.44 % CFUs inactivation rate, while other Candida species showed 41.18% (P<0.05). After PDT, HEp-2 cells showed almost the same viability irrespectively the three different doses applied (P>0.05). HEp-2 cells viability, evaluated just after PDT, unrespective the dose applied, was of 70.81%, being significatively lower than that observed in the control-group (86.21%). Methylene blue and laser PDT on 100, 270 and 450 J/cm2 doses led to significant inactivation of Candida sp., being C. albicans more susceptible than other Candida species. Epithelial cells photodynamic inactivation rate was 2.24-fold lower than the rate observed in Candida sp. This fact suggests a safety margin to in vivo application. Further in vitro and in vivo studies employing animal models are needed to better confirm these results.
O uso indiscriminado de antifúngicos tem acarretado resistência da Candida sp., o que requer novas alternativas de tratamento para a candidose oral. A aplicação da terapia fotodinâmica (PDT) tem sido investigada na inativação de microrganismos patogênicos ao hospedeiro humano. O presente estudo teve por objetivo avaliar, in vitro, a ação da PDT sobre a viabilidade da Candida sp. e de células epiteliais. Culturas de Candida sp. obtidas a partir da coleta de amostras de 38 pacientes portadores de candidose oral e culturas de células HEp-2 foram submetidas à PDT. Foi empregado o laser diodo fosfeto de índio-gálio-alumínio (InGaAlP) nas dosimetrias de 100 J/cm2, 270 J/cm2 e 450 J/cm2 associado ao fotossensibilizador azul de metileno na concentração de 100 Rg/mL. Após o tratamento, a viabilidade das unidades formadoras de colônias (UFCs) e das células epiteliais foi quantificada. As três dosimetrias empregadas determinaram inativação significativa da Candida sp. (p<0,05). A dosimetria de 450 J/cm2 foi a mais eficaz, inativando 72,42% das UFCs de Candida sp., seguida pelas dosimetrias de 270 J/cm2 e 100 J/cm2 com inativação média de 45,84% e 22,83% respectivamente. A Candida albicans foi significativamente mais sensível ao tratamento, com inativação média de 50,44% das UFCs, enquanto as outras espécies de Candida apresentaram inativação média de 41,18% (p<0,05).Depois de submetidas à PDT, as células HEp-2 exibiram viabilidade semelhante nas diferentes dosimetrias (p>0,05). A viabilidade média das células HEp-2, avaliada imediatamente após a PDT, independentemente da dosimetria aplicada, foi de 70,81%, sendo esta significativamente menor do que a do grupo-controle, que foi de 86,21% (p<0,05). A PDT com azul de metileno e laser nas dosimetrias de 100 J/cm2, 270 J/cm2 e 450 J/cm2 determinou inativação significativa da Candida sp., sendo a C. albicans mais sensível que as outras espécies. As células epiteliais HEp-2 foram menos sensíveis à PDT do que a Candida sp., apresentando média de inativação fotodinâmica 2,24 vezes menor que a das células fúngicas, fato que indica a existência de uma margem de segurança para aplicação in vivo. São necessários novos estudos in vitro e em modelos animais para melhor fundamentarem-se os resultados obtidos.
URI: http://hdl.handle.net/10923/525
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