Investigação da ação dos receptores purinérgicos P2Y2 e P2Y12 na proliferação de células de carcinoma escamoso e adenocarcinoma de esôfago

Abstract

O câncer de esôfago, em geral, é diagnosticado em estágio avançado, o que leva a um prejuízo nas terapias empregadas, resultando em uma alta taxa de mortalidade. É dividido em dois subtipos: adenocarcinoma e carcinoma de células escamosas; os dois subtipos diferem quanto a histologia, etiologia e epidemiologia. A sinalização purinérgica utiliza nucleotídeos e nucleosídeos no meio extracelular como moléculas sinalizadoras e já foi relacionada com diferentes tipos de carcinomas. Essas moléculas ligam-se a receptores para adenosina acoplados a proteína G, caracterizados como P1 (A1, A2A, A2B e A3), a receptores ionotrópicos P2X (P2X1- P2X7), e ainda a receptores P2Y (P2Y1, 2, 4, 6, 11, 12,13 14), acoplados a proteína G. Diante das evidências descritas na literatura e a falta de dados correlacionando a sinalização purinérgica com câncer de esôfago, analisamos o papel dos receptores P2Y2 (P2Y2R) e P2Y12 (P2Y12R) nos processos de proliferação, capacidade de formação de colônias, migração, adesão e atividade enzimática das ectonucleotidases e vias de sinalização envolvidas, após o estímulo com nucleotídeos. Para isso, utilizamos as células Kyse-30 e Kyse-450, representativas de carcinoma de células escamosas, e a linhagem OE-33, representativa de adenocarcinoma. Também, verificamos a expressão do P2Y2R em biópsias de pacientes com carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma, comparadas com tecidos não neoplásicos. Observamos que as amostras de biópsia expressam o receptor P2Y2, porém em diferentes intensidades de marcação. As linhagens celulares expressam P2Y2 e P2Y12R, possuem diferentes respostas frente ao estímulo com os nucleotídeos ADP, ATP e UTP, porém o bloqueio desses receptores leva à diminuição da proliferação, formação de população policlonal, adesão e migração. Quanto às vias relacionadas à ação do P2Y2R, verificamos a ativação de ERK1/2 e Akt em diferentes tempos após o estímulo com ATP e UTP. Os dados apresentados neste estudo demonstram que a modulação de receptores purinérgicos P2Y2 e P2Y12, pode tornar-se uma ferramenta promissora para alcançar eficácia no tratamento do câncer de esôfago.

Esophageal cancer, in general, is diagnosed at an advanced stage, which leads to impairment in the therapies employed, resulting in a high mortality rate. It is classified into two subtypes: adenocarcinoma and squamous cell carcinoma; both differ in histology, etiology and epidemiology. Purinergic signaling uses nucleotides and nucleosides in the extracellular medium as signaling molecules, and has been linked to different types of carcinomas. These molecules bind to G-protein coupled adenosine receptors, characterized as P1 (A1, A2A, A2B and A3), to P2X ionotropic receptors (P2X1-P2X7), and to P2Y receptors (P2Y 1, 2, 4, 6, 11, 12, 13 14), coupled to G protein. Given the evidence described in the literature and the lack of data correlating purinergic signaling with esophageal cancer, we analyzed the role of P2Y2 (P2Y2R) and P2Y12 (P2Y12R) receptors in the processes of proliferation, colony formation capacity, migration, adhesion, enzymatic activity of the ectonucleotidases and signaling pathways after the nucleotide stimulation. For this, we used the Kyse- 30 and Kyse-450 cells, representative of squamous cell carcinoma, and the OE-33 line, representative of adenocarcinoma. Also, we verified the expression of P2Y2R in biopsies of patients with squamous cell carcinoma and adenocarcinoma, compared to non-neoplastic tissues. We observed that the biopsy specimens express the P2Y2 receptor, but at different labeling intensities. The cell lines expressing P2Y2 and P2Y12R, have different responses to the stimulus with the nucleotides ADP, ATP and UTP, but the blockade of these receptors leads to a decrease in proliferation, polyclonal population formation, adhesion and migration. Regarding the pathways related to the action of P2Y2R, we verified the activation of ERK1 / 2 and Akt at different times after the stimulation with ATP and UTP. The data presented in this study demonstrate that the modulation of purinergic receptors P2Y2 and P2Y12 may become a promising tool for achieving efficacy in the treatment of esophageal cancer.