| Resumo: | Introduction: Asthma is a disease that affects most children, characterized by inflammation and airway hyperresponsiveness. Asthma has two main phenotypes depending on the presence of atopy. In addition to Th2 cells, Th17 cells, Th1 and Treg cells are involved in disease pathology by secreting cytokines. CD4 T cells have plasticity, which are influenced by environmental and genetic factors. Aim: To assess the phenotypic profile of CD4 T cells in asthmatic children of school age, with or without the presence of atopy and healthy controls and correlate the data with disease severity. In addition, analyze cells expressing more than one transcription factor in the blood of atopic asthmatic children to D. pteronyssinus stimulating mononuclear cells with DerP1 protein. Methods: This was a cross-sectional case-control study, where 8-14 years-old asthmatic and healthy children were recruited of public schools in Porto Alegre/RS. Mononuclear cells were isolated by Histopaque peripheral blood of children and cultured with anti-CD3/CD28 or DerP1 protein. After 24 hours the cells were stained with antibodies specific for transcription factors for analysis of Th2, Th17, Th1 and Treg cells by flow cytometry. Moreover, it was analyzed in plasma allergen-specific IgE specific. Results: The results showed that children with asthma have a higher frequency of CD4+ GATA-3+ compared to controls. Frequency of CD4+GATA-3+RORγt+ cells correlated with disease severity, except with severe therapy resistant asthma (STRA). Atopic patients showed a higher proportion of co-expressing more than one transcription factor cells compared to non-atopic individuals. Stimulation with DerP1 protein enhances the frequency of CD4 + Foxp3 +RORγt+ compared with the control and stimulation with anti-CD3/ CD28.Conclusion: In general, the results presented in this thesis allowed us to conclude that the allergens play an important role in the development of cells expressing more than one transcription factor in atopic patients. In addition, our study was the first to demonstrate that STRA children have a distinct expression profile of regulatory transcription factors of CD4 T cells Th1, Th2, Th17 and Treg compared to other severity levels of the disease.
Introdução: A asma é uma doença prevalente em crianças, tendo como principal característica a inflamação e hiperresponsividade das vias aéreas. Além das células Th2, as células Th17, Th1 e Treg são envolvidas na patologia da doença pela função que elas e as citocinas por elas secretadas exercem. A asma apresenta dois fenótipos principais, os quais dependem da presença de atopia. As células TCD4 apresentam plasticidade, que são influenciadas por fatores ambientais e genéticos. Objetivos: Avaliar o perfil fenotípico de células TCD4 de crianças em idade escolar asmáticas, com ou sem a presença de atopia e de controles saudáveis. Correlacionar os dados obtidos com a severidade da doença. Além disso, avaliar as células que co-expressam mais de um fator de transcrição no sangue de crianças asmáticas atópicas para D. pteronyssinus estimulando as células com a proteína Derp1.Materiais e métodos: Este foi um estudo transversal caso-controle, onde crianças de 8 a 14 anos foram recrutadas de escolas públicas de Porto Alegre/RS, asmáticas e controles. As células mononucleares foram isoladas por Histopaque do sangue periférico destas crianças e colocadas em cultura com anti-CD3/CD28 ou com proteína Derp1. Após 24hs as células foram marcadas com anticorpos específicos para os fatores de transcrição para análise do perfil Th2, Th17, Th1 e Treg por citometria de fluxo. Além disto, foi analisado no plasma a IgE específica para um painel de alergenos. Resultados: Os resultados obtidos mostraram que as comparado com os controles. As células duplo-positivas CD4+GATA-3+RORγt+ correlacionaram com o grau de severidade da doença, exceto com asma severa de difícil controle (ADC). Pacientes atópicos apresentaram uma proporção maior de células co-expressando mais de um fator de transcrição comparados com indivíduos não-atópicos. Estimulação de células provenientes de pacientes atópicos com a proteína Derp1 aumenta a frequência de células CD4+Foxp3+RORγt+ quando comparados com o controle e estimulação com anticorpos anti-CD3 e anti-CD28.Conclusão: De uma maneira geral, os resultados apresentados nesta tese nos permitem concluir que os alérgenos desempenham um papel importante no desenvolvimento das células que expressam mais de um fator de transcrição em pacientes atópicos. Além disso, nosso estudo foi o primeiro a demonstrar que crianças com ADC apresentam um perfil distinto de expressão de fatores de transcrição reguladores de células TCD4 do tipo Th1, Th2, Th17 e Treg quando comparado com crianças com doença menos severa. |
