Participação dos receptores purinérgicos P2x7 na cistite hemorrágica induzida pela ciclofosfamida em camundongos

Abstract

Nucleotídeos extracelulares são moléculas sinalizadoras importantes que medeiam diversos efeitos biológicos, através da ativação de receptores purinérgicos. O ATP é liberado em resposta ao dano celular e os receptores P2X7 têm um papel essencial no início e na manutenção das várias alterações patológicas. A cistite hemorrágica (CH) é um efeito adverso bem conhecido da terapia com ciclofosfamida (CYP), observada em pacientes sob tratamento de muitos tumores sólidos e doenças auto-imunes. Este trabalho teve como objetivo determinar o papel dos receptores P2X7 no modelo de CH induzida por CYP em camundongos. Os efeitos do antagonismo farmacológico ou ausência gênica do receptor P2X7 na CH induzida pela CYP foram avaliados em uma série de parâmetros nociceptivos e inflamatórios. Além disso, a imunopositividade para o receptor P2X7 foi investigada através de análise imunoistoquímica. O pré-tratamento com o antagonista seletivo do receptor P2X7 (A438079) ou a deleção gênica do receptor P2X7 reduziu os escores indicativos de comportamento nociceptivo. As mesmas estratégias produziram uma redução significante dos índices de edema e hemorragia, como indicado pela avaliação macroscópica e histológica. O tratamento com o A438079 também diminuiu significativamente a marcação positiva para c-Fos na medula espinhal e em áreas corticais do cérebro. Notavelmente, a administração do A438079 preveniu o aumento da atividade de MPO, da migração de macrófagos e dos níveis de IL-1b e TNFa no tecido vesical de animais que receberam CYP. Por fim, foi detectado um aumento significativo do receptor P2X7 na bexiga de animais tratados com CYP. O presente estudo revelou a importância do receptor P2X7 na CH induzida pela CYP.A inibição farmacológica deste receptor poderia representar uma nova alternativa terapêutica para esta condição patológica ou, ainda, em outros tipos de cistite sem origem definida.

Extracellular nucleotides are important signaling molecules that mediate many biological effects, through the purinergic receptor activation. ATP is released in response to cellular damage, and P2X7 receptors have an essential role in the onset and maintenance of pathological changes. Haemorrhagic cystitis (HC) is a well known adverse effect of therapy with cyclophosphamide (CYP) used in patients under the treatment of many solid tumours and autoimmune conditions. This study aimed to determine the role of P2X7 receptors in the mouse model of HC induced by CYP. The effects of pharmacological antagonism or genic absence of P2X7 receptor in CYP-induced HC was assessed in a series of nociceptive and inflammatory parameters. In addition the immunopositivity for P2X7 receptors was investigated by means of immunohistochemistry. The pre-treatment with the selective P2X7 receptor antagonist A438079 or genic ablation of P2X7 receptors inhibited the nociceptive behaviour score induced by CYP. The same strategies produced a significant reduction of both oedema and haemorrhage indexes, as indicated by either macroscopic or histological evaluation. A438079 treatment also significantly decreased the positive staining for c-Fos in the lumbar spinal cord and brain cortical areas. Noteworthy, the administration of A438079 markedly prevented the increase of urinary bladder MPO activity and macrophage migration induced by CYP, and widely reduced the tissue levels of IL-1b and TNFa. Finally, P2X7 receptor was found strikingly up-regulated in the bladders of CYP-treated mice. The present study revealed the importance of P2X7 receptors in HC induced by CYP. The pharmacological inhibition of these receptors might represent a new therapeutic alternative for this pathological condition.